Fasudil在EAM小鼠...H信号通路下调IL-6表达_李彦军

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第４４卷第１期西安交通大学学报（医学版）Ｖｏｌ．４４Ｎｏ．１２０２３年１月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉ’ａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）Ｊａｎ．２０２３◇基础研究◇Ｆａｓｕｄｉｌ在ＥＡＭ小鼠中通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通路下调ＩＬ－６表达李彦军１，王宇星２，杨嘉凯１，章培军１，李宛容１，张威１，刘杨青１，张年萍１（１．山西大同大学医学院免疫学研究所，山西大同０３７００９；２．山东大学基础医学院医学遗传学系，山东济南２５００１２）摘要：目的探究法舒地尔（Ｆａｓｕｄｉｌ）在实验性自身免疫性心肌炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ，ＥＡＭ）小鼠治疗中发挥的作用及机制，为临床上Ｆａｓｕｄｉｌ治疗心肌炎提供理论依据。方法以Ｂａｌｂ／ｃ雄性小鼠为研究对象，使用ＭｙＨＣ－α６１４－６２９多肽构建ＥＡＭ小鼠模型。单个核细胞分离和培养检测小鼠脾脏中单个核细胞的数量变化，ＨＥ染色、Ｍａｓｓｏｎ染色和免疫组化分别检测小鼠心肌组织的炎症浸润情况、纤维化情况和ＩＬ－６的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｎｏｔｃｈ１和白细胞介素－６（ＩＬ－６）蛋白的表达，ｑＲＴ－ＰＣＲ检测促炎因子（ＩＬ－１α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６）、ＴＬＲｓ和ＮＯＴＣＨ信号通路的关键基因表达。结果ＥＡＭ小鼠心脏明显增大发白、ＨＷ增加、ＢＷ下降和ＨＷ／ｅ－ＢＷ增大，心肌组织炎症浸润和纤维化加重。ＥＡＭ小鼠经过Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后，上述的症状或者病理特征得到改善。进一步分析发现，ＥＡＭ小鼠心肌组织中促炎因子ＩＬ－１α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６明显增加，但是经过Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后只有ＩＬ－６的表达下调具有统计学差异，此外，还发现ＴＬＲｓ信号可能也在Ｆａｓｕｄｉｌ治疗ＥＡＭ发挥重要作用。ＩＬ－６和Ｎｏｔｃｈ１的表达具有一致性，经过Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后，ＮＯＴＣＨ信号通路的关键基因（Ｎｏｔｃｈ１、Ｈｅｓ１和Ｊａｇ２）显著下调。结论Ｆａｓｕｄｉｌ在ＥＡＭ小鼠中通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通路下调ＩＬ－６的表达，从而发挥保护作用。关键词：法舒地尔；实验性自身免疫性心肌炎；ＮＯＴＣＨ信号通路；ＩＬ－６中图分类号：Ｒ５４２．２１文献标志码：ＡＤＯＩ：１０．７６５２／ｊｄｙｘｂ２０２３０１０１３Ｆａｓｕｄｉｌｅｘｅｒｔｓａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＩＬ－６ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅＮＯＴＣＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎＥＡＭｍｉｃｅ１，ＷＡＮＧＹｕｘｉｎｇ２，ＹＡＮＧＪｉａｋａｉ１，ＺＨＡＮＧＰｅｉｊｕｎ１，ＬＩＷａｎｒｏｎｇ１，ＬＩＹａｎｊｕｎ１，ＬＩＵＹａｎｇｑｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧＮｉａｎｐｉｎｇ１ＺＨＡＮＧＷｅｉ（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｘｉＤａｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄａｔｏｎｇ０３７００９；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ２５００１２，Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＦａｓｕｄｉｌｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ（ＥＡＭ）ｉｎｍｉｃｅｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｕｓｅｏｆＦａｓｕｄｉｌｉｎｔｒｅａｔｉｎｇｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＢａｌｂ／ｃｍａｌｅｍｉｃｅｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｂｊｅｃｔｓ，ａｎｄｔｈｅＥＡＭｍｉｃｅｍｏｄｅｌｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇＭｙＨＣ－α６１４－６２９ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ．Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｉｎｍｏｕｓｅｓｐｌｅｅｎ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄＩＬ－６ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｍｏｕｓｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ，Ｍａｓｓｏｎｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮｏｔｃｈ１ａｎｄＩＬ－６ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ｑＲＴ－ＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓ（ＩＬ－１α，ＩＬ－１βａｎｄＩＬ－６）ａｓｗｅｌｌａｓｋｅｙｇｅｎｅｓｏｆＴＬＲｓａｎｄＮＯＴＣＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＥＡＭｍｉｃｅｓｈｏｗｅｄｉｎｃｒｅａｓｅｄＨＷ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄＢＷ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄＨＷ／ｅ－ＢＷ，ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｎｄｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅ．Ｔｈｅａｂｏｖｅ－ｍｅｎｔｉｏｎｅｄｓｙｍｐｔｏｍｓｏｒｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｆｅａｔｕｒｅｓｗｅｒｅｉｍｐｒｏｖｅｄ收稿日期：２０２２－０１－２５修回日期：２０２２－０９－０８基金项目：山西省基础研究计划青年项目（Ｎｏ．２０２１０３０２１２３３３８）；山西省高等学校科技创新项目（Ｎｏ．２０２１Ｌ３７２）；山西省大学生创新创业训练计划项目（Ｎｏ．２０２２０７９０）；山西大同大学博士科研启动项目（Ｎｏ．２０２１０１９）；山西大同大学大学生创新创业项目（Ｎｏ．ＸＤＣ２０２１１１５）ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒａｍＹｏｕｔｈＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳｈａｎｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ（Ｎｏ．２０２１０３０２１２３３３８），ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉａｌＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＰｒｏｇｒａｍｓｏｆＨｉｇｈｅｒＥｄｕｃａｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓｉｎＳｈａｎｘｉ（Ｎｏ．２０２１Ｌ３７２），ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎａｎｄＥｎｔｒｅｐｒｅｎｅｕｒｓｈｉｐＴｒａｉｎｉｎｇＰｒｏｇｒａｍｆｏｒＣｏｌｌｅｇｅＳｔｕｄｅｎｔｓｏｆＳｈａｎｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ（Ｎｏ．２０２２０７９０），ＰｈＤＲｅｓｅａｒｃｈＳｔａｒｔ－ｕｐＰｒｏｇｒａｍｏｆＳｈａｎｘｉＤａｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎｏ．２０２１０１９），ａｎｄＩｎｎｏｖａｔｉｏｎａｎｄＥｎｔｒｅｐｒｅｎｅｕｒｓｈｉｐＴｒａｉｎｉｎｇＰｒｏｇｒａｍｆｏｒＣｏｌｌｅｇｅＳｔｕｄｅｎｔｓｏｆＳｈａｎｘｉＤａｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎｏ．ＸＤＣ２０２１１１５）通信作者：张年萍，教授，Ｅ－ｍａｉｌ：６０３８３０７７０＠ｑｑ．ｃｏｍ。李彦军与王宇星为共同第一作者。网络出版时间：２０２２－１２－０２网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／／６１．１３９９．Ｒ．２０２２１２０２．１１５０．００１．ｈｔｍｌ本刊网址：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公众号：西安交通大学学报医学版

1１期李彦军，王宇星，杨嘉凯，等．Ｆａｓｕｄｉｌ在ＥＡＭ小鼠中通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通路下调ＩＬ－６表达８３ｉｎＥＡＭｍｉｃｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＦａｓｕｄｉｌ．Ｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓＩＬ－１α，ＩＬ－１βａｎｄＩＬ－６ｉｎｔｈｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｏｆＥＡＭｍｉｃｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｂｕｔｏｎｌｙｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＬ－６ｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｆｔｅｒＦａｓｕｄｉｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ＴＬＲｓｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｍｉｇｈｔａｌｓｏｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅＥＡＭｍｉｃｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＦａｓｕｄｉｌ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＩＬ－６ａｎｄＮｏｔｃｈ１ｗｅｒｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｔｈｅｋｅｙｇｅｎｅｓｏｆＮＯＴＣＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ（Ｎｏｔｃｈ１，Ｈｅｓ１ａｎｄＪａｇ２）ｗｅｒｅｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｆｔｅｒＦａｓｕｄｉｌｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＦａｓｕｄｉｌｅｘｅｒｔｓａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＩＬ－６ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅＮＯＴＣＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎＥＡＭｍｉｃｅ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｆａｓｕｄｉｌ；ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ；ＮＯＴＣＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ；ＩＬ－６心肌炎可以分为感染性和非感染性心肌炎两大１．２主要材料及试剂［１－２］类，患者主要表现为呼吸困难、胸痛、心律失常、心ＤＭＥＭ培养基、青霉素和链霉素购买于Ｇｉｂｃｏ力衰竭、心肌收缩甚至是猝死，是导致青壮年猝死的公司，胎牛血清购买于ＡｕｓＧｅｎｅＸ公司，Ｆａｓｕｄｉｌ购买［３－４］主要原因。已有临床试验结果证实，通过短期的于Ｓｅｌｌｅｃｋ公司，多肽（ＭｙＨＣ－α６１４－６２９）购买于吉尔［３］免疫抑制治疗心肌病，患者的症状可以得到改善。生物有限公司，完全弗氏佐剂购买于Ｓｉｇｍａ公司，培心肌炎患者通常会出现淋巴细胞亚群和巨噬细胞数量养皿和单细胞滤网购买于Ｃｏｒｎｉｎｇ公司，ＲＩＰＡ细胞的改变以及抗体介导的损伤。实验性自身免疫性心肌裂解液和蛋白酶抑制剂购买于碧云天生物科技公司，炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ，ＥＡＭ）小鼠Ｔｒｉｚｏｌ试剂、ＥＣＬ化学发光检测试剂盒和逆转录酶购模型是目前研究心肌炎发病免疫机制最常用的实验模买于Ｔｈｅｒｍｏ公司，２×ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩＭａｒｋｅｒＭｉｘ购买［１］型。于Ｒｏｃｈｅ公司，ＲａｎｄｏｍＰｒｉｍｅｒ、引物和ＨＥ染液购买法舒地尔（Ｆａｓｕｄｉｌ）ＲＯＣＫ抑制剂在心血管疾病于生工生物工程（上海）股份有限公司，Ｍａｓｓｏｎ染色试［５］治疗中发挥着重要的作用。在哺乳动物中，存在两剂盒购买于索莱宝生物有限公司，ＤＡＢ显色液购买于种ＲＯＣＫ丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶同源物———中杉金桥生物技术有限公司，Ｎｏｔｃｈ１（货号３６０８）和ＲＯＣＫ１和ＲＯＣＫ２，在细胞的增殖、转移、凋亡和周ＧＡＰＤＨ（货号５１７４）购买于ＣＳＴ公司，ＩＬ－６（货号［６］期调控等多种生物学过程中发挥着重要作用。此Ｒ１４１２－２）购买于华安生物科技有限公司。外，有研究表明，ＲＯＣＫｓ在心脏生理学中也发挥重１．３ＥＡＭ小鼠模型构建及治疗要作用，ＲＯＣＫｓ在心脏肥大、纤维化和系统性高血Ｂａｌｂ／ｃ雄性小鼠随机分为４组，佐剂对照组、［７］压等多种心血管病理过程中异常激活。ＮＯＴＣＨＥＡＭ组、５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组和Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组信号是一种高度进化保守的信号通路。ＮＯＴＣＨ受各１０只。体家族由四种蛋白质（ＮＯＴＣＨ１－４）组成。其配体有佐剂对照组：在第１天和第８天腹股沟皮下多点注Ｄｅｌｔａ－ｌｉｋｅ１、Ｄｅｌｔａ－ｌｉｋｅ３和Ｄｅｌｔａ－ｌｉｋｅ４，以及Ｊａｇｇｅｄ１射总量为２００μＬ的佐剂稀释液（佐剂:生理盐水＝［８］和Ｊａｇｇｅｄ２。ＮＯＴＣＨ１决定Ｔ淋巴细胞与Ｂ淋巴［８］１:１）；ＥＡＭ组：在第１天和第８天两次免疫，在小鼠腹细胞命运的关键调节信号。ＮＯＴＣＨ１参与胸腺细股沟皮下多点注射总量为２００μＬ含０．２ｍｇ多肽胞发育的早期ＤＮ１、ＤＮ２和ＤＮ３阶段，在Ｔ细胞的［９］（ＭｙＨＣ－α６１４－６２９）的免疫混悬液；５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对调节和分化中至关重要。照组：第８天开始，隔天在ＥＡＭ小鼠腹腔注射５ｍＬ／Ｌ由于心肌炎表现为胸痛、呼吸困难和心悸等症ＤＭＳＯ生理盐水，直到２１ｄ处死；Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组：状，通常与冠状动脉疾病等常见疾病相似，因此常被［１０］第８天开始，隔天在ＥＡＭ小鼠腹腔注射Ｆａｓｕｄｉｌ忽视，寻找有效的预防和治疗方法显得尤其重要。本研究主要利用ＥＡＭ小鼠模型探究ＲＯＣＫ抑制剂４０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ），直到２１ｄ处死。在治疗心肌炎的作用及机制。１．４脾脏单个核细胞的获取取小鼠的整个脾脏于ＰＢＳ溶液中充分研磨，１材料与方法ＰＢＳ清洗５～８次，每次１０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，然１．１小鼠后用单细胞滤网过滤并１０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，最４０只５～６周龄Ｂａｌｂ／ｃ雄性小鼠，购买于华阜康后加入１０ｍＬＤＭＥＭ培养基重悬后移入１０ｃｍ培生物科技有限公司。动物实验被山西大同大学医学养皿中，３７℃、５０ｍＬ／ＬＣＯ２培养５ｄ，统计每组每只与生物学伦理委员会批准。小鼠脾脏培养出的单个核细胞数量。本刊网址：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公众号：西安交通大学学报医学版

2８４西安交通大学学报（医学版）第４４卷１．５ＨＥ和Ｍａｓｓｏｎ染色分析小鼠心尖组织的炎症浸表１ｑＲＴ－ＰＣＲ各基因的引物序列润和纤维化程度Ｔａｂ．１ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｑＲＴ－ＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓｏｆｇｅｎｅｓＨＥ染色步骤参考文献［１１］。小鼠心尖组织切引物名称引物序列（５′－３′）片后染色和拍照，采用双盲法，２名病理学专家同时ＩＬ－６ＦＡＡＣＣＡＣＧＧＣＣＴＴＣＣＣＴＡＣＴＴ对小鼠炎症情况评分。评分分为５个等级，炎症浸润ＲＴＣＡＴＴＴＣＣＡＣＧＡＴＴＴＣＣＣＡＧＡＩＬ－１αＦＴＣＴＧＣＣＡＴＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＴＣ０～１９％、２０％～３９％、４０％～５９％、６０％～７９％和ＲＴＣＡＧＡＡＴＣＴＴＣＣＣＧＴＴＧＣＴＴＧ８０％～１００％分别记为“０”“１”“２”“３”和“４”，根据评分ＩＬ－１βＦＧＴＧＴＣＴＴＴＣＣＣＧＴＧＧＡＣＣＴＴＣ对比分析各组小鼠心尖组织炎症浸润程度。ＲＴＣＡＴＣＴＣＧＧＡＧＣＣＴＧＴＡＧＴＧＣＭａｓｓｏｎ染色：石蜡切片脱蜡至水，Ｗｅｉｇｅｒｔ铁苏Ｔｌ２ＦＴＣＡＧＴＣＣＣＡＡＡＧＴＣＴＡＡＡＧＴＣＧ木素染液染色７ｍｉｎ；Ｍａｓｓｏｎ蓝化液处理５ｍｉｎ后，ＲＡＴＣＴＡＣＧＧＧＣＡＧＴＧＧＴＧＡＡＡＡ水洗１ｍｉｎ；磷钼酸处理２ｍｉｎ，苯胺蓝染液染色Ｔｌ４ＦＴＴＡＴＴＣＡＧＡＧＣＣＧＴＴＧＧＴＧＴＡＴＣ２ｍｉｎ，乙醇脱水脱色３ｍｉｎ，二甲苯透明封片，显微镜ＲＣＴＣＣＣＡＴＴＣＣＡＧＧＴＡＧＧＴＧＴＴ拍照。利用ＩｍａｇｅＪ统计分析蓝色区域的比例，根据蓝Ｎｏｔｃｈ１ＦＣＧＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＡＴＣＡＡＧ色区域占比分析对比各组小鼠心尖组织纤维化程度。ＲＴＡＧＧＡＡＧＧＣＡＧＣＣＡＣＡＴＣＧＨｅｓ１ＦＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＣＡＡＧ１．６免疫组化检测小鼠心尖组织ＩＬ－６的表达ＲＡＣＧＣＴＣＧＧＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡ免疫组化步骤参考文献［１１］。小鼠心尖组织切Ｊａｇ２ＦＣＡＡＴＧＡＣＴＴＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣ片后染色和拍照，利用ＩｍａｇｅＪ统计分析棕色区域的ＲＣＴＧＣＴＧＴＴＣＴＴＧＧＣＧＡＴＧＧＴ比例，得染色区域的比例。Ｄｉｌ１ＦＡＡＴＧＧＡＧＧＡＣＧＡＴＧＴＴＣＡＧＡＴＡＡ１．７Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｎｏｔｃｈ１和ＩＬ－６蛋白的表达ＲＡＣＡＧＧＴＡＡＧＡＧＴＴＧＣＣＧＡＧＧＴＲＩＰＡ裂解液提取细胞总蛋白，ＢＣＡ法蛋白定量ＧａｐｄｈＦＧＴＧＴＣＴＴＴＣＣＣＧＴＧＧＡＣＣＴＴＣ后，使用４０μｇ总蛋白变性后进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，ＲＴＣＡＴＣＴＣＧＧＡＧＣＣＴＧＴＡＧＴＧＣ具体实验步骤参考文献［１１］。Ｎｏｔｃｈ１（兔抗）１:１０００，２结果ＧＡＰＤＨ（兔抗）１:３０００，ＩＬ－６（兔抗）１:１０００；二抗（兔抗或鼠抗）１:５０００。２．１ＥＡＭ小鼠模型成功建立１．８ｑＲＴ－ＰＣＲ检测Ｎｏｔｃｈ１和ＩＬ－６等基因的表达ＥＡＭ组小鼠的心脏明显增大并且略显发白。称Ｔｒｉｚｏｌ提取ＲＮＡ，逆转录及定量ＰＣＲ步骤参考文量每组小鼠的初始体质量、最后体质量和心脏重量发献［１１］。Ｇａｐｄｈ为内参，根据２－△△Ｃｔ计算不同样品之间现，与佐剂对照组相比，ＥＡＭ组小鼠心脏重量明显增目的基因的表达差异。所用引物序列见表１。加，差异有统计学意义（图１Ａ和图１Ｃ，表２）。计算小１．９统计学分析鼠体质量的变化和心脏重量与体质量的比值，结果显利用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５，数据以Ｍｅａｎ±ＳＥＭ导示，ＥＡＭ组小鼠与佐剂对照组相比体质量明显减轻入处理，然后采用两组数据对比ｔ检验计算Ｐ值。（图１Ｂ，表２），心脏重量与体质量的比值明显增大Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。（图１Ｄ，表２），以上结果说明ＥＡＭ小鼠模型建立成功。Ａ：佐剂对照组与ＥＡＭ组小鼠心脏代表性图；Ｂ：与佐剂对照组相比ＥＡＭ组小鼠体质量减轻，＊＊＊Ｐ＜０．００１；Ｃ：与佐剂对照组相比ＥＡＭ组小鼠心脏的重量增加，＊＊＊Ｐ＜０．００１；Ｄ：与佐剂对照组相比ＥＡＭ组小鼠心脏重量与体质量的比值明显增大，＊＊＊Ｐ＜０．００１。图１与佐剂对照组相比ＥＡＭ组小鼠ＢＷ、ＨＷ和ＨＷ／ｅ－ＢＷ的变化Ｆｉｇ．１ＣｈａｎｇｅｓｏｆＢＷ，ＨＷａｎｄＨＷ／ｅ－ＢＷｉｎＥＡＭｇｒｏｕｐｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ本刊网址：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公众号：西安交通大学学报医学版

3１期李彦军，王宇星，杨嘉凯，等．Ｆａｓｕｄｉｌ在ＥＡＭ小鼠中通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通路下调ＩＬ－６表达８５表２佐剂对照组和ＥＡＭ组小鼠ＢＷ、ＨＷ和ＨＷ／ｅ－ＢＷ的鼠心脏明显减小，称量小鼠的初始体质量、最后体质量变化和心脏的重量发现，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组心脏重量明显减Ｔａｂ．２ＣｈａｎｇｅｓｏｆＢＷ，ＨＷａｎｄＨＷ／ｅ－ＢＷｉｎＥＡＭｇｒｏｕｐ轻，且具有统计学意义（图２Ａ和图２Ｃ，表３）。计算两ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ组小鼠体质量的变化和心脏重量与体质量的比值，结佐剂对照组ＥＡＭ组指标果显示，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组（ｘ±ｓ）（ｘ±ｓ）相比体质量明显增加（图２Ｂ，表３），心脏重量与体质量ｓ－ＢＷ（ｇ）２５．７５±０．９８２６．１７±１．５９ｅ－ＢＷ（ｇ）２９．４５±０．４１２６．０９±１．８１的比值明显升高（图２Ｄ，表３）。Ｍａｓｓｏｎ染色结果显ｃ－ＢＷ（ｇ）３．６９±１．０１－０．０８±１．０５示，ＥＡＭ组小鼠与佐剂对照组相比蓝色占比明显增ＨＷ（ｇ）０．１７±０．０１０．２１±０．０１加，说明小鼠心肌组织纤维化明显增加且具有统计学ＨＷ／ｅ－ＢＷ（ｇ／ｇ）０．００５８±０．０００４０．００８０±０．０００５差异，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组相ｓ－ＢＷ：小鼠的初始体质量；ｅ－ＢＷ：小鼠最后体质量；ｃ－ＢＷ：小鼠体质比蓝色占比明显减少，说明小鼠心肌组织纤维化得到量的变化；ＨＷ：小鼠心脏的重量。缓解且具有统计学差异（图２Ｅ和图２Ｆ）。以上结果说２．２Ｆａｓｕｄｉｌ处理改善ＥＡＭ小鼠的症状明，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗能够明显改善ＥＡＭ小鼠的症状。与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组相比，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小Ａ：Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组小鼠心脏代表性图；Ｂ：与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组相比Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠体质量增加，＊＊＊Ｐ＜０．００１；Ｃ：与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组相比Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠心脏的重量减轻，＊＊＊Ｐ＜０．００１；Ｄ：与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组相比Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠心脏重量与体质量的比值明显减小，＊＊＊Ｐ＜０．００１；Ｅ：４组小鼠心肌组织Ｍａｓｓｏｎ染色代表性图；Ｆ：佐剂对照组、ＥＡＭ组、５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组和Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠心肌组织纤维化比例，＊＊＊Ｐ＜０．００１。图２与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组相比Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠ＢＷ、ＨＷ、ＨＷ／ｅ－ＢＷ和心肌组织纤维化的变化Ｆｉｇ．２ＣｈａｎｇｅｓｏｆＢＷ，ＨＷ，ＨＷ／ｅ－ＢＷａｎｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎＦａｓｕｄｉｌ－ｔｒｅａｔｅｄｍｉｃｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ５ｍＬ／ＬＤＭＳＯｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ２．３Ｆａｓｕｄｉｌ处理改善ＥＡＭ小鼠的炎症３Ｂ）。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，单个核ＨＥ结果显示，与佐剂对照组相比，ＥＡＭ组小鼠细胞数量的增加能够间接反映出机体的炎症状况。心肌组织炎症浸润明显增加，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠与脾脏是小鼠最大的免疫器官，因此，分离培养小鼠脾５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照小鼠对比心肌组织炎症浸润得脏单个核细胞能够反映小鼠的炎症情况。将小鼠整到缓解，炎症评分均具有统计学差异（图３Ａ和图个脾脏研磨后培养发现，ＥＡＭ组小鼠与佐剂对照组本刊网址：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公众号：西安交通大学学报医学版

4８６西安交通大学学报（医学版）第４４卷相比，单个核细胞的数量明显增加，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小２．４Ｆａｓｕｄｉｌ显著降低ＥＡＭ小鼠心肌组织中ＩＬ－６鼠与５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ相比单个核细胞的数量明显减的表达小，且均具有统计学差异（图３Ｃ）。ｑＲＴ－ＰＣＲ检测结果显示，ＥＡＭ组小鼠与佐剂表３５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组和Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠ＢＷ、ＨＷ对照组相比促炎因子ＩＬ－１α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６均明显增和ＨＷ／ｅ－ＢＷ的变化加，且具有统计学意义，但Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后与对照组Ｔａｂ．３ＣｈａｎｇｅｓｏｆＢＷ，ＨＷ，ＨＷ／ｅ－ＢＷａｎｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅ小鼠相比只有ＩＬ－６明显降低且具有统计学差异，而ｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎＦａｓｕｄｉｌ－ｔｒｅａｔｅｄｍｉｃｅａｎｄ５ｍＬ／ＬＤＭＳＯｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐＩＬ－１α和ＩＬ－１β并无统计学差异（图４Ａ、图４Ｂ和指标５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组图４Ｃ）。同时结果显示，ＥＡＭ组小鼠与佐剂对照组（ｘ±ｓ）（ｘ±ｓ）相比Ｔｌｒ２和Ｔｌｒ４均增加，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后，Ｔｌｒ２和ｓ－ＢＷ（ｇ）２６．０２±１．３０２６．０３±２．０８Ｔｌｒ４均减小，但Ｔｌｒ２具有统计学差异，Ｔｌｒ４无统计ｅ－ＢＷ（ｇ）２６．０２±１．４３２９．６５±２．０３ｃ－ＢＷ（ｇ）０±０．５０３．６２±１．１３学差异（图４Ｄ和图４Ｆ）。以上结果显示，Ｆａｓｕｄｉｌ可ＨＷ（ｇ）０．２０±０．０１０．１７±０．０２以改善ＥＡＭ小鼠的症状可能是通过降低促炎因子ＨＷ／ｅ－ＢＷ（ｇ／ｇ）０．００８０±０．０００４０．００５８±０．０００６ＩＬ－６的表达而实现的，可能还与ＴＬＲｓ的活性抑制ｓ－ＢＷ：小鼠的初始体质量；ｅ－ＢＷ：小鼠最后的体质量；ｃ－ＢＷ：小鼠体相关。质量的变化；ＨＷ：小鼠心脏的重量。Ａ：４组小鼠心肌组织ＨＥ染色代表性图；Ｂ：小鼠心肌组织炎症浸润评分；Ｃ：小鼠脾脏分离培养单个核细胞的数量，＊＊＊Ｐ＜０．００１。图３Ｆａｓｕｄｉｌ治疗能够降低ＥＡＭ小鼠心肌组织的炎症Ｆｉｇ．３ＦａｓｕｄｉｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｒｅｄｕｃｅｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎＥＡＭｍｉｃｅ２．５抑制ＮＯＴＣＨ信号通路降低ＩＬ－６的表达充分证实，Ｆａｓｕｄｉｌ治疗ＥＡＭ小鼠降低促炎因子ＩＬ－６Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果显示，在ＥＡＭ小鼠心肌的表达是通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通路实现的。组织中Ｎｏｔｃｈ１和ＩＬ－６的表达均增加，当使用Ｆａｓｕｄ－３讨论ｉｌ治疗后两者表达明显降低（图５Ａ）。免疫组化进一［１］步证实小鼠心肌组织中ＩＬ－６的表达结果和Ｗｅｓｔｅｒｎ心肌炎是一种炎症性心脏疾病。非感染性心［１２］ｂｌｏｔｔｉｎｇ结果一致（图５Ｂ和图５Ｃ）。利用ｑＲＴ－ＰＣＲ肌炎由有毒物质和药物（如免疫检查点抑制剂）、［１３］检测了ＮＯＴＣＨ信号通路的下游靶基因，结果显示全身性免疫疾病等诱发。不同类型心肌炎的病Ｎｏｔｃｈ１、Ｈｅｓ１和Ｊａｇ２在ＥＡＭ小鼠心肌组织中的表因、诱发和病程差异很大，是心肌炎治疗的重要挑战。达明显上调。经过Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后三者的表达均下调，本研究发现，ＥＡＭ小鼠利用Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后，与但是Ｎｏｔｃｈ１和Ｈｅｓ１具有统计学差异而与Ｊａｇ２没有治疗对照组小鼠相比，ＨＷ降低，ＢＷ增加，ＨＷ／ＢＷ统计学差异（图５Ｄ、图５Ｅ、图５Ｆ和图５Ｇ）。以上结果降低，心肌组织的炎症浸润和纤维化程度减轻，脾脏本刊网址：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公众号：西安交通大学学报医学版

5１期李彦军，王宇星，杨嘉凯，等．Ｆａｓｕｄｉｌ在ＥＡＭ小鼠中通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通路下调ＩＬ－６表达８７Ａ－Ｃ：ｑＲＴ－ＰＣＲ检测促炎因子ＩＬ－１α、ＩＬ－１β和ＩＬ－６的表达，ｎｓＰ＞０．０５，＊Ｐ＜０．０５，＊＊＊Ｐ＜０．００１；Ｄ、Ｅ：ｑＲＴ－ＰＣＲ检测Ｔｌｒ２和Ｔｌｒ４的表达，ｎｓＰ＞０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。图４ｑＲＴ－ＰＣＲ检测促炎因子和ＴＬＲｓ信号通路关键基因的表达Ｆｉｇ．４ｑＲＴ－ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｓａｎｄｋｅｙｇｅｎｅｓｏｆＴＬＲｓｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙＡ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测Ｎｏｔｃｈ１和ＩＬ－６的表达；Ｂ：４组小鼠心肌组织ＩＬ－６染色代表性图；Ｃ：免疫组化检测佐剂对照组、ＥＡＭ组、５ｍＬ／ＬＤＭＳＯ对照组和Ｆａｓｕｄｉｌ治疗组小鼠心肌组织ＩＬ－６着色比例；Ｄ－Ｇ：ｑＲＴ－ＰＣＲ检测Ｎｏｔｃｈ１、Ｈｅｓ１、Ｊａｇ２和Ｄｉｌｌ的表达。ｎｓＰ＞０．０５，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１。图５Ｆａｓｕｄｉｌ通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通路的活性降低ＩＬ－６表达Ｆｉｇ．５Ｆａｓｕｄｉｌｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅＩＬ－６ｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮＯＴＣＨｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ本刊网址：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公众号：西安交通大学学报医学版

6８８西安交通大学学报（医学版）第４４卷单个核细胞数量明显减少等，证实Ｆａｓｕｄｉｌ在ＥＡＭ［５］ＫＯＣＨＪＣ，ＴＡＴＥＮＨＯＲＳＴＬ，ＲＯＳＥＲＡＥ，ｅｔａｌ．ＲＯＣＫｉｎｈｉ－小鼠的治疗中发挥着重要的作用。进一步探究ｂｉｔｉｏｎｉｎｍｏｄｅｌｓｏｆｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｆｏｒｃｌｉｎｉ－ｃａｌｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，２０１８，１８９：１－２１．Ｆａｓｕｄｉｌ发挥作用的机制，发现促炎因子ＩＬ－１α、ＩＬ－１β［６］ＤＡＩＹ，ＬＵＯＷＪ，ＣＨＡＮＧＪ．Ｒｈｏｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｃａｒｄｉａｃ和ＩＬ－６的表达在ＥＡＭ小鼠心肌组织中均升高，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．ＣｕｒｒＯｐｉｎＰｈｙｓｉｏｌ，２０１８，１：１４－２０．Ｆａｓｕｄｉｌ治疗后都有所下降，但ＩＬ－６的变化最为明显，［７］ＡＢＤＥＬ－ＭＡＧＩＤＡＦ．ＰｏｔｅｎｔｉａｌｏｆＲＯＣＫｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓａｓｔｒｅａｔ－因此重点探讨了ＩＬ－６。结果显示，在小鼠的心肌组ｍｅｎｔｆｏｒｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅｓ，ｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｍｏｒｅ［Ｊ］．ＡＣＳ织中ＩＬ－６和Ｎｏｔｃｈ１的表达具有一致性，并且还发现ＭｅｄＣｈｅｍＬｅｔｔ，２０１９，１０（６）：８４１－８４２．［８］ＣＡＳＴＲＯＲＣ，ＧＯＮＣＡＬＥＳＲＡ，ＺＡＭＢＵＺＩＦＡ，ｅｔａｌ．ＮｏｔｃｈＮＯＴＣＨ信号通路的相关靶基因Ｎｏｔｃｈ１、Ｈｅｓ１和ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｓ：ＲｏｌｅｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎＪａｇ２都有明显的变化。以上所有结果证实，Ｆａｓｕｄｉｌｏｆｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．ＩｎｆｌａｍｍＲｅｓ，２０２１，７０（３）：２６１－２７４．改善ＥＡＭ小鼠的症状是通过抑制ＮＯＴＣＨ信号通［９］ＨＯＺＵＭＩＫ，ＭＡＩＬＨＯＳＣ，ＮＥＧＩＳＨＩＮ，ｅｔａｌ．Ｄｅｌｔａ－ｌｉｋｅ４ｉｓ路的活性，进一步抑制ＩＬ－６的表达而发挥作用。ｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅｉｎｔｈｙｍｉｃｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒＴｃｅｌｌｄｅｖｅｌｏｐ－研究还发现，ＴＲＬｓ信号异常，尤其是Ｔｒｌ２和ｍｅｎｔ［Ｊ］．ＪＥｘｐＭｅｄ，２００８，２０５（１１）：２５０７－２５１３．［１０］ＴＳＣＨＯＰＥＣ，ＣＯＯＰＥＲＬＴ，ＴＯＲＲＥ－ＡＭＩＯＮＥＧ，ｅｔａｌ．Ｍａｎａｇｅ－Ｔｒｌ４，文献中已经有报道ＴＲＬｓ信号在自身免疫性疾ｍｅｎｔｏｆｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙｉｎａｄｕｌｔｓ［Ｊ］．ＣｉｒｃＲｅｓ，［１４，１５］病中发挥重要作用，因此，未来的研究可以重点２０１９，１２４（１１）：１５６８－１５８３．向该方向探讨。此外，本研究重点探讨的是促炎因［１１］ＬＩＹＪ，ＨＵＨＬ，ＷＡＮＧＹＸ，ｅｔａｌ．ＣＵＬ４Ｂｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏ子，在免疫系统调节中促炎因子和抑炎因子都发挥着ｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｎｅｓｓｂｙｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｍｉＲ３４ａｉｎ重要作用，因此，也可以从抑炎因子方面进一步探讨。ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ，２０２０，９（２）：２０．［１２］ＢＡＩＫＡＨ，ＴＳＡＩＫＫ，ＯＨＤＹ，ｅｔａｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌ本研究为Ｆａｓｕｄｉｌ治疗心肌炎提供了一定的参考价ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓｏｆｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｉｍ－值，相信Ｆａｓｕｄｉｌ在未来的医学中应用的越来越ｍｕｎｅｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＳｃｉ（Ｌｏｎｄ），２０２１，１３５广泛。（５）：７０３－７２４．［１３］ＣＡＦＯＲＩＯＡＬＰ，ＡＤＬＥＲＹ，ＡＧＯＳＴＩＮＩＣ，ｅｔａｌ．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ参考文献：ａｎｄｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｉｎｓｙｓｔｅｍｉｃｉｍ－［１］ＴＳＣＨＯＰＥＣ，ＡＭＭＩＲＡＴＩＥ，ＢＯＺＫＵＲＴＢ，ｅｔａｌ．Ｍｙｏｃａｒｄｉ－ｍｕｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ：ＡｐｏｓｉｔｉｏｎｓｔａｔｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅＥｕｒｏｐｅａｎｔｉｓａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ：ＣｕｒｒｅｎｔｅｖｉｄｅｎｃｅａｎｄＳｏｃｉｅｔｙｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙＷｏｒｋｉｎｇＧｒｏｕｐｏｎＭｙｏｃａｒｄｉａｌａｎｄＰｅｒｉ－ｆｕｔｕｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＣａｒｄｉｏｌ，２０２１，１８（３）：１６９－１９３．ｃａｒｄｉａｌＤｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＥｕｒＨｅａｒｔＪ，２０１７，３８（３５）：２６４９－２６６２．［２］ＳＡＧＡＲＳ，ＬＩＵＰＰ，ＣＯＯＰＥＲＬＴＪＲ．Ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ，［１４］ＱＩＵＢ，ＸＵＸＦ，ＹＩＰ，ｅｔａｌ．ＣｕｒｃｕｍｉｎｒｅｉｎｆｏｒｃｅｓＭＳＣ－ｄｅｒｉｖｅｄ２０１２，３７９（９８１７）：７３８－７４７．ｅｘｏｓｏｍｅｓｉｎａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｖｉａｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｍｉＲ－［３］ＴＹＭＩＮＳＫＡＡ，ＯＺＩＥＲＡＮＳＫＩＫ，ＣＡＦＯＲＩＯＡＬＰ，ｅｔａｌ．Ｍｙ－１２４／ＮＦ－ｋＢａｎｄｍｉＲ－１４３／ＲＯＣＫ１／ＴＬＲ９ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｏｃａｒｄｉｔｉｓａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙｉｎ２０２１：Ａｎｕｐｄａｔｅ［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＭｏｌＭｅｄ，２０２０，２４（１８）：１０８５５－１０８６５．［Ｊ］．ＰｏｌＡｒｃｈＩｎｔｅｒｎＭｅｄ，２０２１，１３１（６）：５９４－６０６．［１５］ＷＡＮＧＬＬ，ＧＡＯＹ，ＺＨＡＮＧＧ，ｅｔａｌ．ＥｎｈａｎｃｉｎｇＫＤＭ５Ａ［４］ＡＭＭＩＲＡＴＩＥ，ＦＲＩＧＥＲＩＯＭ，ＡＤＬＥＲＥＤ，ｅｔａｌ．Ｍａｎａｇｅ－ａｎｄＴＬＲａｃｔｉｖｉｔｙｉｍｐｒｏｖｅｓｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｉｍｍｕｎｅｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｍｅｎｔｏｆＡｃｕｔｅＭｙｏｃａｒｄｉｔｉｓａｎｄＣｈｒｏｎｉｃＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＣａｒｄｉｏ－ｂｌｏｃｋａｄｅ［Ｊ］．ＳｃｉＴｒａｎｓｌＭｅｄ，２０２０，１２（５６０）：ｅａａｘ２２８２．ｍｙｏｐａｔｈｙ：ＡｎＥｘｐｅｒｔＣｏｎｓｅｎｓｕｓＤｏｃｕｍｅｎｔ［Ｊ］．ＣｉｒｃＨｅａｒｔ（编辑卓选鹏）Ｆａｉｌ，２０２０，１３（１１）：ｅ００７４０５．本刊网址：ｈｔｔｐ：／／ｙｘｘｂ．ｘｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ微信公众号：西安交通大学学报医学版