CIRBP对小鼠血管平滑肌...增殖及迁移的调控及机制研究_赵嘉琪

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·204·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2023，39（2）：204-211杂志网址：http://www.cjpp.net［文章编号］1000-4718（2023）02-0204-08CIRBP对小鼠血管平滑肌细胞增殖及迁移的调控及机制研究*1222△1，2△赵嘉琪，杨大春，王强，孙雄山，杨永健（1西南医科大学临床医学院，四川泸州646000；2西部战区总医院心内科，四川成都610083）［摘要］目的：探讨冷诱导RNA结合蛋白（CIRBP）对小鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及迁移过程的调控及机制。方法：将雄性C57BL/6J小鼠分为假手术对照组、假手术干扰组、颈总动脉损伤对照组和颈总动脉损伤干扰组，每组5只。造模后按照组别分别用阴性对照腺病毒（AD-NC）和沉默CIRBP腺病毒（AD-CIRBPI）转染，28d后观察CIRBP表达及血管内膜的增生情况。将小鼠VSMCs分为对照组和腺病毒沉默组，分别用AD-NC和AD-CIRBPI转染细胞48h，然后加入激活雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）活性的胰岛素。通过RT-qPCR检测CIRBP的mRNA表达，Westernblot检测CIRBP、磷酸化核糖体蛋白S6（p-S6Ser235/236）和磷酸化4E结合蛋白1（p-4EBP1Thr37/46）蛋白水平变化，Ki67免疫荧光染色和CCK-8实验检测细胞增殖，划痕实验检测细胞迁移，HE染色检测颈动脉内膜增生程度。结果：沉默CIRBP后，VSMCs的活力下降，Ki67阳性细胞比率降低，细胞迁移速度减慢，同时mTORC1活性下降。加入胰岛素恢复mTORC1活性后，细胞活力、Ki67阳性细胞率和细胞迁移速度下降幅度减弱。损伤小鼠颈总动脉内皮后CIRBP表达增加，体内干扰小鼠CIRBP表达后，小鼠血管内皮损伤后内膜增生程度减轻。结论：CIRBP通过mTORC1途径加强小鼠VSMCs增殖及迁移，促进小鼠血管损伤后血管内膜增生。［关键词］血管平滑肌细胞；细胞增殖；细胞迁移；冷诱导RNA结合蛋白；哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1［中图分类号］R543.5；R363.2+1［文献标志码］Adoi：10.3969/j.issn.1000-4718.2023.02.002Regulatoryeffectofcold-inducibleRNA-bindingproteinonproliferationandmigrationofmousevascularsmoothmusclecellsanditsmechanism1222△1，2△ZHAOJiaqi，YANGDachun，WANGQiang，SUNXiongshan，YANGYongjian（1SchoolofClinicalMedicine，SouthwestMedicalUniversity，Luzhou646000，China；2DepartmentofCardiovascularMedi⁃cine，TheGeneralHospitalofWesternTheaterCommand，Chengdu610083，China.E-mail：yyj10001@126.com；shan19910927@sina.com）［ABSTRACT］AIM：Toinvestigatetheregulatoryeffectofcold-inducibleRNAbindingprotein（CIRBP）ontheproliferationandmigrationofmousevascularsmoothmusclecells（VSMCs），andtoexploreitsmechanism.METHODS：MaleC57BL/6Jmiceweredividedinto4groups：sham+adenovirus-negativecontrol（AD-NC）group，sham+adenovirus-CIRBPinhibitor（AD-CIRBPI）group，carotidvascularinjury+AD-NCgroup，andcarotidvascularinjury+AD-CIRBPIgroup，with5miceineachgroup.Aftertheinjurymodelwasestablished，themiceweretransfectedwithAD-NCorAD-CIRBPI.TheCIRBPexpressionandvascularintimalhyperplasiaweremeasuredat28dafterinjury.MouseVSMCsweredividedintoAD-NCandAD-CIRBPIgroup.ThecellsofthesetwogroupsweretransfectedwithAD-NCandAD-CIRBPIfor48h，respectively.Theactivityofmammaliantargetofrapamycincomplex1（mTORC1）wasrestoredbyinsulin.ThemRNAexpressionofCIRBPwasexploredbyRT-qPCR.ThelevelsofCIRBP，phosphorylatedribosomalproteinS6（p-S6Ser235/236）andphosphorylated4E-bindingprotein1（p-4EBP1Thr37/46）weredetectedbyWesternblot.ThecellproliferationwasexploredbyKi67immunofluorescencestainingandCCK-8assay.Thecellmigrationwasdeterminedbyscratchtest.ThecarotidintimalhyperplasiawasdeterminedbyHEstaining.RESULTS：TheviabilityofVSMCs，theratioofKi67-positivecells，wound-healingrateandtheactivityofmTORC1weredecreasedaftersilencingofCIRBP.However，thein⁃hibitoryeffectsofCIRBPsilencingoncellviability，ratioofKi67-positivecellsandwound-healingratewereattenuatedaf⁃［收稿日期］2022-09-16［修回日期］2022-11-04*［基金项目］国家自然科学基金资助项目（No.82070289）；四川省自然科学基金资助项目（No.2022NSFSC0820）△通讯作者杨永健Tel：028-86571250；E-mail：yyj10001@126.com；孙雄山Tel：028-86571255；E-mail：shan19910927@sina.com

1·205·terrestoringtheactivityofmTORC1byinsulin.TheexpressionofCIRBPwasincreasedaftermousecommoncarotidvas⁃cularinjury.ThevascularintimalhyperplasiawasattenuatedafterinterferingwiththeexpressionofCIRBPinvivo.CON⁃CLUSION：CIRBPpromotestheproliferationandmigrationofmouseVSMCs，andvascularintimalhyperplasiaaftermousecommoncarotidvascularinjurythroughthemTORC1pathway.［KEYWORDS］vascularsmoothmusclecells；cellproliferation；cellmigration；cold-inducibleRNA-bindingprotein；mammaliantargetofrapamycincomplex1在我国，患心血管病的人数在迅速增加，其中动约25g（成都药康生物科技有限公司），许可证编号：脉粥样硬化性心血管病的患病率与死亡率逐年上SCXK（川）2020-034。小鼠先适应性培养1周，白天［1-2］升，并且有年轻化的趋势。经皮冠脉介入治疗适当光照12h，恒温通风，喂以水和食物。（percutaneouscoronaryintervention，PCI）是主要解决2　细胞和主要试剂方法，但术后血管再狭窄严重制约PCI的预后。血小鼠主动脉平滑肌细胞系MOVAS（深圳市豪地管内皮细胞受到机械损伤后，经过内皮剥落，血小板华拓生物科技有限公司）；RT-qPCR实验试剂盒（Ta⁃活化，促炎细胞因子和趋化因子的释放以及血管平KaRa）；RT-qPCR实验所用的引物（成都擎科伟业生滑肌细胞移动到内皮下等过程，最终使血管内膜增物技术有限公司）；DMEM高糖培养液、0.25%胰蛋［3］生，引起血管内再狭窄。当前血管平滑肌细胞增白酶及青霉素+链霉素双抗（HyClone）；胎牛血清殖的分子调控机制主要包括Ras/丝裂原活化蛋白激（Gibco）；磷酸盐缓冲液（phosphate-bufferedsaline，［4］酶、Janus激酶/信号转导及转录激活因子等，针对PBS）、5%牛血清白蛋白（bovineserumalbumin，血管内再狭窄的治疗手段进步显著，但术后血管再BSA）和CIRBP抗体（武汉三鹰生物科技有限公司）；［5］狭窄的发生率仍有5%~10%，提示仍有未知的分子4E结合蛋白1（4E-bindingprotein1，4EBP1）抗体、磷机制需要探索。Thr37/46酸化4EBP1（phosphorylated4EBP1，p-4EBP1）抗冷诱导RNA结合蛋白（cold-inducibleRNA-体、GAPDH单克隆抗体、核糖体蛋白S6（ribosomalbindingprotein，CIRBP）是一种冷休克相关蛋白，属proteinS6，S6）抗体、磷酸化S6（phosphorylatedS6，p-于RNA结合蛋白家族，在冷应激等条件下可以促进Ser235/236S6）抗体和山羊抗兔Ⅱ抗（CellSignalingTech⁃［6］翻译。CIRBP能调控器官与组织细胞的生长、增殖nology）；4´，6-二脒基2苯基吲哚（4′，6-diamidino-2-［7］［8］［9］和分化、维持端粒酶活性、抑制细胞凋亡、促进phenylindole，DAPI）和Ki-67抗体（Bioss）；重组人胰［10］炎症细胞因子的激活与释放。多个研究表明岛素（Solarbio）；CIRBP腺病毒（上海吉凯基因有限公CIRBP在心力衰竭和血管损伤等心血管疾病中有重司）；ECL发光液（Millipore）；细胞活力及毒性检测［10-14］要意义，当血管受到各种损伤和病理因素刺激（CCK-8）试剂盒（Biosharp）；苏木精-伊红染色试剂时，血管平滑肌细胞会从分化状态转变为去分化状（北京索莱宝科技有限公司）。态，增殖异常活跃，并进一步向内膜迁移，导致内膜3　主要方法增生及参与动脉粥样硬化、肺动脉高压等心血管疾3.1VSMCs分组及干预　用含1%双抗和10%胎牛［15］病的进展。既往研究显示CIRBP在乳腺癌、黑色血清的DMEM高糖培养液培养VSMCs，将培养皿放素瘤、垂体腺瘤和胰腺导管腺癌等肿瘤细胞中发挥在5%CO、37℃培养箱中。隔2~3d更换一次培养2［16-19］促进肿瘤细胞增殖作用。但是CIRBP对血管平液，当细胞增殖到90%左右用0.25%胰蛋白酶消化滑肌细胞增殖、迁移和血管内膜增生引起血管内再生长状态良好的细胞，并且按照1∶2~1∶4传代培养，狭窄的调控目前并不清楚。本研究通过机械损伤小选择对数生长期细胞进行实验。为观察CIRBP对细鼠颈总动脉内皮的方法构建血管再狭窄模型，用腺胞增殖和迁移的影响，根据预实验结果，将腺病毒复病毒感染方法干扰CIRBP表达，探究CIRBP在小鼠感染指数（MOI）定为100，按照分组分别向细胞中加VSMCs增殖、迁移和血管内膜增生中的作用机制，为入阴性对照腺病毒（AD-NC）和沉默CIRBP腺病毒PCI术后防治血管再狭窄提供参考资料。（AD-CIRBPI）（105247-1），继续培养6~8h，随后用PBS冲洗2遍，换成完全培养液继续共孵育48h。为材料和方法进一步探究CIRBP是否通过mTORC1调节VSMCs增1　动物殖及迁移，在沉默CIRBP表达后，向相应的组别中加20只约7周龄SPF级的雄性C57BL/6J小鼠，重入人重组胰岛素（5mg/L）孵育24h。

2·206·3.2RT-qPCR测定CIRBP的mRNA表达　用RNA用0.3%戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉已经称了重的小提取试剂盒提取细胞总RNA，用基因相对定量法标鼠，然后将麻醉好的小鼠固定于手术台面上，把颈部准化各组RNA浓度，接着反转录为cDNA然后扩增毛发脱去后予以消毒处理，接着在颈正中做约1cm反应。内参照β-actin（NM_007393）的上游引物序列的纵行切口，分离左颈总动脉，用粗糙导丝来回摩擦为5′-CGTGAAAAGATGACCCAGATCA-3′，下游引血管内皮后，迅速取出导丝，结扎导丝穿刺点，缝合［21］物序列为5′-TGGTACGACCAGAGGCATACAG-3′；消毒切口。将小鼠分为损伤对照组、损伤转染组、CIRBP（NM_007705）的上游引物序列为5′-AGCTC⁃假手术对照组和假手术转染组，每组5只，损伤对照GGGAGGGTCCTACAG-3′，下游引物序列为组和假手术对照组转染阴性对照腺病毒AD-NC，损［20］5′⁃GAGGGCTTTTACTCGTTGTGTGT-3′。伤转染组和假手术转染组转染腺病毒AD-CIRBPI，3.3Westernblot检测细胞CIRBP蛋白表达及反映在术后7、14和21d通过尾静脉继续追加注射腺病mTORC1活性的底物S6和4EBP1的磷酸化水平　用毒；28d后取出小鼠颈总动脉，标记按组分装。全蛋白提取试剂盒提取VSMCs蛋白，用BSA试剂盒3.8HE染色　将各组小鼠的血管取材，4%多聚甲测定蛋白浓度。取适量的蛋白样品进行电泳，然后醛固定，石蜡包埋、切片、染色、封片，拍照记录，观察把蛋白转至相应孔径的聚偏二氟乙烯膜，用牛血清对比血管结构及内膜增生程度。白蛋白或者5%脱脂奶粉室温条件下封闭1h，再加4　统计学处理Thr37/46采用GraphPadPrism8.3.0软件对数据进行绘入对应的抗体（CIRBP、4EBP1、p-4EBP1、S6、p-Ser235/236图，采用SPSS21软件分析数据。用均数±标准差S6和GAPDH，稀释比：1∶1000）4℃孵育过夜。接着用缓冲液洗涤，然后加入山羊抗兔Ⅱ抗（稀释（mean±SD）表示定量资料。选用独立样本t检验进比：1∶1000），孵育1h后，用缓冲液洗涤，接着加入行两组间比较，选用单因素方差分析进行多组间比ECL化学发光液显色，最后通过ImageJ分析条带。较。以P<0.05为差异有统计学意义。3.4CCK-8检测细胞活力　用完全培养基将细胞结果8配成含有2×10/L的细胞悬液，铺板到96孔板中，每个孔加100µL，每组设置3个复孔。当细胞增殖到1　对照组与腺病毒沉默组细胞中CIRBP表达比较80%左右时每孔加入10µLCCK-8溶液，放到细胞培通过RT-qPCR实验得到，与对照组相比，腺病毒养箱内继续孵育2h，用酶标仪检测450nm处的吸光沉默组中CIRBP的mRNA水平显著下降（P<0.01），度（A），比较不同组间的细胞活力。同时Westernblot实验显示，和对照组比较，腺病毒3.5Ki-67免疫荧光染色检测细胞增殖　将爬片放沉默组中的CIRBP蛋白表达亦显著降低（P<0.05），入6孔板中，加入配制好的细胞悬液，进行干预后，见图1。倒掉培养液用PBS清洗3次，用5%BSA封闭30min2　干扰CIRBP的表达后小鼠VSMCs增殖和迁移后加入Ⅰ抗Ki-67（稀释比：1∶500），放入湿盒中4℃情况孵育过夜，再次用PBS清洗3次后加入荧光Ⅱ抗（稀划痕实验结果显示，与对照组相比，干扰CIRBP释比：1∶500），避光条件下室温孵育1h，PBS再次清表达后细胞划痕愈合速度减慢（P<0.05），见图2A。洗后加DAPI染液避光室温孵育10min，用PBS清洗Ki-67免疫荧光染色显示，和对照组相比，干扰甩干后，用抗荧光淬灭剂封片，显微镜采集图像，记CIRBP表达显著降低Ki-67阳性细胞率（P<0.05），见录Ki-67阳性细胞率。图2B。3.6　划痕实验检测细胞迁移速度　使用记号笔在6CCK-8实验检测显示，干扰CIRBP表达之后在孔板背面大约每隔1cm均匀划一条竖线，每个孔划450nm处的吸光度显著下降（P<0.05），见表1。3条竖线。向6孔板中加入一定数量的细胞，按照分3　干扰CIRBP的表达后，mTORC1的变化及小鼠组进行干预，待细胞增殖到90%左右用无菌的规格VSMCs增殖和迁移情况为100µL吸头垂直于竖线划一道痕，随后用PBS洗经过Westernblot实验，结果显示和对照组比涤细胞3遍，立刻拍摄时间点为0h的细胞，接着加较，干扰CIRBP表达后，VSMCs中mTORC1底物p-Thr37/46Ser235/236入无血清培养液，放入细胞培养箱中培养，分别在4EBP1和p-S6蛋白水平显著降低（P<0.0512h及24h两个时点用光学显微镜拍照，以划痕的或P<0.01），见图3。宽窄变化快慢测量细胞迁移率。然而向VSMCs相应组别中加入胰岛素后Thr37/46Ser235/2363.7　小鼠分组及颈总动脉内皮损伤模型的建立　mTORC1底物p-4EBP1和p-S6蛋白表达显

3·207·Figure1.TheproteinandmRNAlevelsofCIRBPweredecreasedinVSMCstransfectedbyAD-CIRBPI.A：theproteinlevelofCIRBPwasexploredbyWesternblot；B：themRNAexpressionofCIRBPwasexploredbyRT-qPCR.Mean±SD.n=3.*P<0.05，**P<0.01vsAD-NCgroup.图1　腺病毒干扰CIRBP降低了小鼠VSMCs中CIRBP的mRNA和蛋白表达水平Figure2.SilencingofCIRBPsuppressedmigrationandproliferationofmouseVSMCs.A：themigrationofthecellswasexploredbyscratchtest；B：theproliferationofVSMCswasexploredbyKi-67staining（α-SMA：α-smoothmuscleactin）.Scalebar=50µm.Mean±SD.n=5.*P<0.05vsAD-NCgroup.图2　干扰CIRBP表达抑制小鼠VSMCs增殖和迁移表1　各组细胞活力比较著增高（P<0.01），此时Ki-67阳性细胞率（P<0.01）Table1.Comparisonofcellviabilityofeachgroup（Mean±SD.和细胞划痕愈合速度（P<0.05或P<0.01）下降程度n=6）减慢，见图4。GroupAvalue4　小鼠血管内皮损伤后各组CIRBP表达及血管内AD-NC3.06±0.42膜变化AD-CIRBPI2.57±0.18*进一步行Westernblot实验显示，和假手术组对*P<0.05vsAD-NCgroup.比，颈动脉内皮损伤组CIRBP表达显著升高（P<

4·208·Figure3.TheactivityofmTORC1wasreducedinVSMCstransfectedwithAD-CIRBPI.Theproteinlevelsofp-4EBP1Thr37/46，4EBP1，p-S6Ser235/236andS6wereexploredbyWesternblot.Mean±SD.n=3.*P<0.05，**P<0.01vsAD-NCgroup.图3　干扰CIRBP表达减弱小鼠细胞中mTORC1活性0.05），见图5A，血管内膜增厚，血管管腔狭窄；在颈以上研究结果表明CIRBP在心血管病理调控中有重动脉内皮损伤的基础上再干扰CIRBP表达，结果显要意义，但在机械损伤血管内皮后内膜增生中的作示内膜增生及血管管腔再狭窄程度减轻，见图5B。用及机制并未提及。本研究观察到增殖型VSMCs中CIRBP表达增加，腺病毒干扰CIRBP表达后，可以抑讨论制VSMCs的增殖和迁移，说明CIRBP正相调控冠状动脉粥样硬化性心脏病是全世界发病率和VSMCs的增殖和迁移过程，然而调控的具体分子机死亡率的主要病因，PCI可让一部分有阻塞性冠状动制尚不清楚。［22］mTOR是丝/苏氨酸激酶，在控制细胞代谢、生长脉疾病的患者获益，然而手术引起的血管内再狭［29］窄并发症依旧无法完全避免，整个病理过程一方面和增殖等信号网络中具有核心作用。mTORC1是可能与新生内膜破裂、薄帽纤维弹性瘤形成、非闭塞mTOR发挥效应的多蛋白复合体之一，参与调节蛋白［23］［30］性血栓形成等有关；另一方面，血管内皮细胞受损质和脂质合成、细胞生长、增殖和自噬等。CIRBP后一氧化氮、前列环素等减少，组织因子和活性氧等是否通过mTORC1调控VSMCs增殖和迁移尚不清表达增加，同时血管壁内细胞释放促炎因子等促进楚。接着我们通过体外实验进一步研究了CIRBP和了血管平滑肌细胞表型转换，位于中膜的血管平滑mTORC1的关系，干扰CIRBP表达后，mTORC1下游肌细胞被激活，增殖并迁移到内皮下引起内膜增生的两个核心底物S6和4EBP1的磷酸化水平均降低，［3］表明了CIRBP正向调控mTORC1活性。然后根据分也是重要的病理基础，是预防血管内再狭窄的关［31］键之一。血小板衍生生长因子BB（platelet-derived组加入胰岛素，观察到干扰CIRBP表达后S6和growthfactor-BB，PDGF-BB）是VSMCs表型转化过程4EBP1的磷酸化水平发生逆转，说明胰岛素此时已［15］［24］激活mTORC1活性。当mTORC1活性被恢复之后，重要的刺激因子，Sun等的研究表明用20µg/L的PDGF-BB处理血管平滑肌细胞之后会形成增殖通过一系列功能学实验显示干扰CIRBP所致VSMCs型VSMCs，本实验通过干扰CIRBP表达，探讨CIRBP增殖和迁移的抑制效应被削弱，由此我们证明对小鼠VSMCs增殖、迁移、血管内膜增生的调控及有CIRBP可能通过mTORC1途径发挥促进小鼠VSMCs关机制。增殖及迁移的作用。CIRBP能和多种细胞内信号分子相互作用发挥我们通过建立小鼠血管再狭窄的模型进一步探生物学效应，如与能编码昼夜节律调节器蛋白的究CIRBP在血管内皮损伤后内膜增生中的作用。实［25］验结果显示损伤组CIRBP蛋白表达高于假手术组，RNA结合，促进翻译；结合TLR4及其附属蛋白［14］提示血管内皮损伤后CIRBP表达量显著增加，说明MD2复合物引发炎症反应；结合TLR4诱导内质网［26］其在血管内膜增生中可能发挥某种调控作用。用腺应激等。在心力衰竭患者和心肌梗死小鼠心脏中［27］病毒转染小鼠干扰CIRBP表达后，CIRBP表达降低CIRBP表达降低，导致心肌细胞凋亡增多。Yang［10］后血管内膜增生及血管腔狭窄程度减轻，提示等的研究结果显示CIRBP通过刺激小鼠肺血管内皮细胞中的Nlrp3炎症小体组装和激活、caspase-1的CIRBP促进小鼠血管内皮损伤后内膜增生。激活以及促进IL-1β的释放，导致内皮功能障碍，而综合以上实验证明，CIRBP可能通过激活［28］Nlrp3炎症通路与新生血管内膜增生密切联系。mTORC1途径加强小鼠VSMCs增殖和迁移，加重血

5·209·Figure4.TheinhibitoryeffectsofCIRBPsilencingonmigrationandproliferationwereattenuatedafterrestoringtheactivityofmTORC1byinsulin.A：theproteinlevelsofp-4EBP1Thr37/46andp-S6Ser235/236wereexploredbyWesternblotafterrestoringtheactivityofmTORC1byinsulin（n=3）；B：themigrationofthecellswasexploredbyscratchtestafterrestoringtheactivityofmTORC1byinsulin（n=5）；C：theproliferationofthecellswasexploredbyKi-67stainingafterrestoringtheactivityofmTORC1byinsulin（n=5；α-SMA：α-smoothmuscleactin）.Scalebar=50µm.Mean±SD.*P<0.05，**P<0.01vsAD-NCgroup；#P<0.05，##P<0.01vsAD-CIRBPIgroup.图4　胰岛素激活mTORC1减弱了干扰CIRBP表达对小鼠VSMCs增殖和迁移的抑制作用

6·210·Figure5.TheexpressionofCIRBPandpathologicalchangesofcarotidarteryinmiceofdifferentgroups.A：theproteinlevelofCIRBPwasexploredbyWesternblot；B：pathologicalchangesofcarotidarteryweredeterminedbyHEstaining（scalebar=50µm）.Mean±SD.n=3.*P<0.05vsshamgroup.图5　小鼠血管内皮损伤后CIRBP表达增加及干扰CIRBP表达后受损血管内膜增生程度减轻管内皮损伤后血管再狭窄，为防治PCI术后血管再diol，2018，15（2）：173-184.狭窄及改善经皮冠脉介入治疗的预后提供了参考资［6］Al-FageehMB，SmalesCM.Cold-inducibleRNAbindingprotein（CIRP）expressionismodulatedbyalternative料，但对于分子机制还需深入研究。mRNAs［J］.RNA，2009，15（6）：1164-1176.［参考文献］［7］刘和宇，夏伟.冷诱导RNA结合蛋白的生物学功能与信号通路［J］.中国生物化学与分子生物学报，2018，［1］ZhaoD，LiuJ，WangM，etal.Epidemiologyofcardio⁃34（7）：697-705.vasculardiseaseinChina：currentfeaturesandimplica⁃LiuHY，XiaW.Biologicalfunctionandsignalpathwayoftions［J］.NatRevCardiol，2019，16（4）：203-212.CIRBP［J］.ChinJBiochemMolBiol，2018，34（7）：［2］AnderssonC，VasanRS.Epidemiologyofcardiovascular697-705.diseaseinyoungindividuals［J］.NatRevCardiol，2018，［8］ZhangY，WuY，MaoP，etal.Cold-inducibleRNA-15（4）：230-240.bindingproteinCIRP/hnRNPA18regulatestelomeraseac⁃［3］PashovaA，WorkLM，NicklinSA.Theroleofextracellu⁃tivityinatemperature-dependentmanner［J］.NucleiclarvesiclesinneointimaformationpostvascularinjuryAcidsRes，2016，44（2）：761-775.［J］.CellSignal，2020，76：109783.［9］ZhangH，XueJ，ZhangZ，etal.Cold-inducibleRNA-［4］WangD，UhrinP，MocanA，etal.Vascularsmoothmus⁃bindingproteininhibitsneuronapoptosisthroughthesup⁃clecellproliferationasatherapeutictarget.Part1：mo⁃pressionofmitochondrialapoptosis［J］.BrainRes，leculartargetsandpathways［J］.BiotechnolAdv，2018，2015，1622：474-483.36（6）：1586-1607.［10］YangW，SharmaA，WangZ，etal.Cold-inducibleRNA-［5］PlevaL，KuklaP，HlinomazO.Treatmentofcoronaryin-bindingproteincausesendothelialdysfunctionviaactiva⁃stentrestenosis：asystematicreview［J］.JGeriatrCar⁃tionofNlrp3inflammasome［J］.SciRep，2016，6：26571

7·211·［11］LongT，JingR，KuangF，etal.CIRBPprotectsH9C22253-2261.cellsagainstmyocardialischemiathroughinhibitionofNF-［21］SunX，LiS，GanX，etal.NF2deficiencyacceleratesκBpathway［J］.BrazJMedBiolRes，2017，50（4）：neointimahyperplasiafollowingvascularinjuryviapro⁃e5861.motingYAP-TEAD1interactioninvascularsmoothmus⁃［12］LiuY，XingJ，LiY，etal.Chronichypoxia-inducedclecells［J］.Aging（AlbanyNY），2020，12（10）：9726-Cirbphypermethylationattenuateshypothermiccardiopro⁃9744.tectionviadown-regulationofubiquinonebiosynthesis［22］HiraiT，GranthamJA.Indicationsandpatientselection［J］.SciTranslMed，2019，11（489）：eaat8406forpercutaneouscoronaryinterventionofchronictotaloc⁃［13］LiuC，ChengX，XingJ，etal.CIRBP-OGFRaxissafe⁃clusions［J］.IntervCardiolClin，2021，10（1）：1-5.guardsagainstcardiomyocyteapoptosisandcardiotoxicity［23］NicolaisC，LakhterV，VirkHUH，etal.Therapeuticop⁃inducedbychemotherapy［J］.IntJBio.Sci，2022，18tionsforin-stentrestenosis［J］.CurrCardiolRep，2018，（7）：2882-2897.20（2）：7.［14］QiangX，YangW，WuR，etal.Cold-inducibleRNA-［24］SunX，ZhaoW，WangQ，etal.InhibitionofVRK1sup⁃bindingprotein（CIRP）triggersinflammatoryresponsespressesproliferationandmigrationofvascularsmoothmus⁃inhemorrhagicshockandsepsis［J］.NatMed，2013，19clecellsandintimahyperplasiaafterinjuryviamTORC1/（11）：1489-1495.β-cateninaxis［J］.BMBRep，2022，55（5）：244-249.［15］ZhangD，CaoY，LiuD，etal.Theetiologyandmolecu⁃［25］MorfJ，ReyG，SchneiderK，etal.Cold-inducibleRNA-larmechanismunderlyingsmoothmusclephenotypebindingproteinmodulatescircadiangeneexpressionpost⁃switchinginintimalhyperplasiaofveingraftandtheregu⁃transcriptionally［J］.Science，2012，338（6105）：379-383.latoryroleofmicroRNAs［J］.FrontCardiovascMed，［26］KhanMM，YangW，BrennerM，etal.Cold-inducible2022，9：935054.RNA-bindingprotein（CIRP）causessepsis-associated［16］GuoX，WuY，HartleyRS.Cold-inducibleRNA-bindingacutelunginjuryviainductionofendoplasmicreticulumproteincontributestohumanantigenRandcyclinE1de⁃stress［J］.SciRep，2017，7（1）：41363.regulationinbreastcancer［J］.MolCarcinog，2010，49［27］ChenM，FuH，ZhangJ，etal.CIRPdownregulationren⁃（2）：130-140.derscardiaccellspronetoapoptosisinheartfailure［J］.［17］ChangET，PalakPR，YangQ，etal.Heterogenousribo⁃BiochemBiophysResCommun，2019，517（4）：545-550.nucleoproteinA18（hnRNPA18）promotestumorgrowth［28］WeiW，LiX，XuM.Inhibitionofvascularneointimahy⁃byincreasingproteintranslationofselectedtranscriptsinperplasiabyFGF21associatedwithFGFR1/Syk/NLRP3cancercells［J］.Oncotarget，2016，7（9）：10578-10593.inflammasomepathwayindiabeticmice［J］.Atherosclero⁃［18］JianF，ChenY，NingG，etal.ColdinducibleRNAsis，2019，289：132-142.bindingproteinupregulationinpituitarycorticotrophade⁃［29］LiuG，SabatiniDM.mTORatthenexusofnutrition，nomainducescorticotrophcellproliferationviaErksig⁃growth，ageinganddisease［J］.NatRevMolCellBiol，nalingpathway［J］.Oncotarget，2016，7（8）：9175-9187.2020，21（4）：183-203.［19］ChenX，XieH，WangX，etal.CIRBPknockdownatten⁃［30］SaxtonRA，SabatiniDM.mTORsignalingingrowth，me⁃uatestumourigenesisandimprovesthechemosensitivityoftabolism，anddisease［J］.Cell，2017，169（2）：361-371.pancreaticcancerviathedownregulationofDYRK1B［J］.［31］YinS，LiuL，GanW.Therolesofpost-translationalmodi⁃FrontCellDevBiol，2021，9：667551.ficationsonmTORsignaling［J］.IntJMolSci，2021，22［20］ZhouM，YangW，JiY，etal.Cold-inducibleRNA-binding（4）：1784.proteinmediatesneuroinflammationincerebralischemia（责任编辑：宋延君，李淑媛）［J］.BiochimBiophysActaGenSubj，2014，1840（7）：