DB1304∕T 417-2022 噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程(邯郸市).pdf

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ICSDB1304邯郸市地方标准DB1304/T417—2022噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程2022-12-29发布2022-12-30实施邯郸市市场监督管理局发布 DB1304/T417—2022前言本文件按照GB/T1.1－2020给出的规则起草。本文件由河北工程大学提出。本文件起草单位：河北工程大学、峰峰矿区市场监督管理局。本文件主要起草人：钟翠红、马金波、张彦昌、程瑞、杨利、朱阵、宿欣、袁英、吴丽丽、刘金霞、汲如芬、王海忠、支龙彬。I DB1304/T417—2022噬菌体防控鸡源沙门菌技术规程1范围本文件规定了鸡源沙门菌及其噬菌体分离鉴定、噬菌体悬浮液的制备、防控措施等技术要求。本文件适用于鸡源沙门菌的噬菌体预防和治疗。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验NY/T388畜禽养殖场环境质量标准NY/T541动物疫病实验室检验采样方法NY/T555动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4沙门菌的分离鉴定参照NY/T541采集样品后，按照GB4789.4-2016分离鉴定沙门菌。5噬菌体混悬液的制备5.1污水采集与处理。从养鸡场污水管道采集污水样品，8000r/min离心15min，取上清液，弃沉淀，经0.22μm微孔滤器过滤，滤液备用。5.2噬菌体的分离纯化。将鉴定的沙门菌作为诱导菌，利用双层琼脂平板法培养噬菌体，挑选大小一致噬菌斑，再利用双层琼脂平板法纯化培养噬菌体。吸取噬菌体纯化液，加至电镜专用铜网上，用2%醋酸铀染色，干燥，通过透射电子显微镜观察噬菌体超微结构。再利用双层琼脂平板法对具有典型形态特征的噬菌体进行纯化。5.3宽谱噬菌体的筛选。将鉴定的沙门菌菌液接种于双层平板，静置，再取噬菌体悬液滴于双层琼脂平板上，倒置于37℃恒温箱中，过夜培养，观察双层琼脂平板是否形成噬菌斑，根据噬菌体吞噬不同种类病原菌菌株的数量筛选宽谱噬菌体。1 DB1304/T417—20225.4噬菌体混悬液的制备。将0.5mL病原菌噬菌体混悬液加到3mLLB液体培养基后，分别加入100μL同种病原菌菌液，37℃220r/min条件下，置于摇床震荡培养16h。4℃条件下8000r/min离4心10min，将沉淀再用无菌水悬浮；再用0.22μm滤膜过滤悬液。滤液（噬菌体浓度≥1×10PFU/mL）4℃保存。5.5噬菌体混悬液污染状况检测。取噬菌体混悬液，均匀涂布于普通营养琼脂平板培养基，37℃倒置培养24h，观察培养平板有无菌落生长。若有细菌菌落生长，应重新过滤或制备噬菌体混悬液。6防控6.1鸡舍环境病原菌的净化。根据鸡源沙门菌的分离鉴定种类制备噬菌体混悬液，按1%比例向新制备沙门菌噬菌体混悬液加水，混匀，用稀释液喷洒地面及料槽，每周1次。6.2饲养管理。鸡舍内保持清洁，通风良好，符合畜禽养殖场环境质量标准要求；定期进行环境消毒，及时清除病死鸡。7治疗7.1消除病原。参照6.1噬菌体混悬液净化鸡舍环境病原菌。严重病例，可同时配合药物治疗。7.2辅助治疗。加强饲养管理，做好乳房卫生，提高奶牛抗病力；同时参照6.1.1用消毒液、噬菌体混悬液喷洒鸡舍地面和料槽。8生物安全实验室操作参照NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则。_________________________________2