实验一、培养基制备与消毒灭菌课件

《实验一、培养基制备与消毒灭菌课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

实验一、培养基制备与消毒灭菌

1实验目的及要求了解培养基配制原理，学习并掌握培养基制备方法。了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌方法。学习一些微生物的实验准备工作。

2实验原理培养基的制备培养基：满足微生物生长的营养需要，人工配制的混合营养基质。用途：用于微生物的分离、培养、增殖、保藏及鉴定。牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养）马铃薯糖培养基（常用于培养真菌）高氏一号培养基（用于培养放线菌）

3配制原则根据营养不同配制不同培养基注意各种营养物质的浓度及配比调节适宜的pH值考虑加生长因子培养基应物美价廉灭菌处理培养基

41根据化学组成分类培养基培养基分类：（1）天然培养基（2）合成培养基（3）半合成培养基

5

6（2）合成培养基全由化学成分已知的物质配制的培养基。成分确定。如：高氏培养基、察氏培养基。优点：成分确定，重复性强，宜于科学研究如菌种选育，遗传分析。实验室用。缺点：费用较高。培养基

7（3）半合成培养基由部分天然物质和一些成份已知的化学药品配制而成。如：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。优点：营养成分更全面、均衡。实验室、发酵业用得最多。培养基

82根据物理状态分类培养基（1）固体培养基（2）半固体培养基（3）液体培养基

9（1）固体培养基概念：在液体培养基中加入凝固剂——琼脂、明胶、硅胶等。常用的是琼脂（洋菜）。琼脂加入量1.5～2.0％。▼成分为多缩半乳糖▼绝大多数微生物不能利用▼融化温度96℃，凝固温度45℃▼对微生物无毒性固体培养基作用培养菌落进行分离、鉴定、计数、保藏琼脂的特性：

10（2）半固体培养基（3）液体培养基加入凝固剂。琼脂加入量0.2～0.5%作用：观察细菌的运动状况。不加凝固剂用于发酵业。液体培养。培养基

11培养基3按用途差异分类（1）基础培养基（2）加富培养基（3）选择培养基（4）鉴别培养基（5）活体培养基

12（1）基础培养基概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。用于普通微生物培养。细菌通用培养基——牛肉膏蛋白胨培养基。真菌通用培养基——马铃薯蔗糖培养基。

13（2）加富培养基在普通培养基中加入某些特殊物质或某些生长素，只适于一种或一类微生物的生长。（3）选择培养基根据培养微生物的生理特性配制。可促进某种微生物生长，抑制某类微生物生长。如：加青霉素的培养基，分离霉菌和酵母菌。加1%酚——分离放线菌特点：某种微生物富集逐渐淘汰其它各种微生物。培养基

14（4）鉴别培养基特点：●确保所培养的微生物有丰富的营养条件。●显示微生物的某些形态构造或生理代谢上的特点。如：伊红－美兰培养基区分大肠杆菌和产气肠杆菌。（5）活体培养基用某些活的动植物体或离体的生活组织细胞作培养基。病毒培养。概念：用以区别不同微生物种类的培养基。培养基

15消毒与灭菌消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病原微生物）。灭菌：应用理化方法杀灭物体上所有微生物。

16类型一、加热高温灭菌1.干热灭菌▲火焰烧灼灭菌▲热空气灭菌2.湿热灭菌▲常压蒸汽灭菌▲高压蒸汽灭菌▲煮沸法灭菌▲超高温灭菌二、紫外线灭菌三、过滤灭菌四、化学药剂的消毒与灭菌消毒与灭菌

17一.高温灭菌：利用高温使菌体蛋白和核酸变性而失去活力以达到杀菌的目的。二.紫外线灭菌：诱发菌体核酸结构变异，及使空气中氧电离、水氧化而产生杀菌化学物质以杀灭杂菌。三.过滤除菌：将处理的含菌液体或气体通过细菌过滤器，使杂菌被机械截留从而达到除菌。四.化学药剂的消毒和灭菌：杀菌剂（破坏微生物的代谢机能并有致死作用）；消毒剂；防腐剂（抑制微生物的生长繁殖）。消毒与灭菌

18利用温度的灭菌方法高温灭菌：蛋白质凝固变性，酶失活。高温灭菌干热灭菌湿热灭菌火焰灭菌烘箱内干燥热空气灭菌巴斯德消毒法间歇灭菌法高压蒸汽灭菌法消毒与灭菌

191干热灭菌(dryheatsterilization)1）火焰灭菌：接种时的用具如接种环等无经济价值的物体。特点：彻底、迅速。2）干燥热空气箱灭菌用法：160-170℃,2小时（利用热空气灭菌)特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死。所以温度高、时间长。消毒与灭菌

202湿热灭菌(利用饱和热蒸汽灭菌)1）巴斯德消毒法(pasteurization)a方法：63~66℃----30min或71℃---15min或135℃or150℃---2secb特点：不破坏营养物质，并杀死病原菌。c适用：牛奶、饮料等食品生产。消毒与灭菌

212）间歇灭菌法a方法：28~37℃24h培养37℃24h培养100℃/15－30min100℃/15－30min100℃/15－30min用水蒸汽把培养基加热到100℃，分几次蒸煮以达到彻底灭菌又保护营养成分的目的。b适用：营养含量高、不适于用高压蒸汽灭菌的特殊培养基、药品的灭菌。此法麻烦、周期长。消毒与灭菌2湿热灭菌(利用饱和热蒸汽灭菌)

223）高压蒸汽灭菌法:利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，提高温度以达到高温灭菌目的方法。a方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）20min-30min。b适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。c注意事项：▲灭菌开始排净冷空气；▲灭菌终了，缓慢降压；▲灭菌结束，趁热取出物品。消毒与灭菌2湿热灭菌(利用饱和热蒸汽灭菌)

23干热灭菌的操作包扎。装箱（物品不可与灭菌箱内壁接触，且不可摆放过挤）灭菌（启动开关，并打开排气孔，待温度升至80℃-100℃关闭排气孔，继续升温至160℃-170℃计时，恒温2小时）降温，取物（关闭电源，自然降温到60度开箱取物）消毒与灭菌

24消毒与灭菌

25高压蒸汽灭菌的操作灭菌前准备（在锅内加适量水）。装放物品（不要过挤，且容器口端不要与物品接触）加热放气（打开放气阀，待有大量水汽排出，维持3—5分钟，锅内空气排尽，关上放气阀）升温保压（温度，压力升至灭菌所需时计时，压力1.05Kg/cm2,121.3℃，20—30分钟）出锅（关闭电源，待指针回零，打开放气阀，稍等一些时间，再取物）消毒与灭菌

26消毒与灭菌

27

28★湿热灭菌较干热灭菌效果好1)特点：温度低、时间短、灭菌效果好。2)灭菌效果好的原因：菌体内含水量越高凝固温度越低。蒸汽冷凝会放出潜热。饱和水蒸汽穿透力强。消毒与灭菌

29实验内容分组操作：分8组，8人1组。每组需要做的工作。（1）1、2、3、4、5组做牛肉膏蛋白胨培养基。每组做500ml。装试管15支，余下装三角瓶。（2）6、7、8组做马铃薯糖培养基。每组200ml。装试管15管，余下装三角瓶。（3）每组包1ml吸管8支。（1支/人）（示范）（4）每组包10ml吸管3支。（5）每组装9ml无菌水10管。（示范）（6）每组包培养皿2包（每包6个）。（示范）（7）装锅灭菌。

301　牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养）（1）培养基组成：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g琼脂18--20g水1000mlpH7.0----7.2（2）配置方法①　称量：②　溶化：电炉加热熔化③　调节pH：④　分装：试管和三角瓶⑤　包扎：双层纸和绳子。⑥　灭菌：高压蒸汽灭菌。实验内容

31（2）配制方法：①　称量：注意马铃薯去皮后切成丝称量。②　溶化：将马铃薯丝放入水中置于电炉上加热并不断搅拌，煮沸5—10min，用多层纱布过滤得滤液，在滤液中加入其他药品，不断搅拌直至完全溶解。③　分装：④　包扎：⑤　灭菌：2　马铃薯糖培养基（通常用于培养真菌）（1）培养基组成：马铃薯200g葡萄糖或蔗糖20g琼脂18---20g水1000mlpH自然实验内容

323、高压蒸汽灭菌（1）灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，将内桶放入。（2）装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。（3）加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，维持3-5min，锅内空气排尽，关上排气阀。（4）升温保压：★压力为1.05kg/cm2（121.3℃）,20-30min（5）出锅：隔断热源，自然降温，待压力表指针回到零，打开排气阀，稍等一些时间，再开盖取物。实验内容

33实验报告（1）培养微生物的培养基应具备哪些条件？（2）为什么培养基配制好后必须立即灭菌？（3）在培养基中，琼脂有何作用？它有哪些特性？（4）使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时应注意哪些事项？（5）比较干热灭菌与高压蒸汽灭菌的异同。

34设计性实验结合已做过的实验，学生选择一个自己感兴趣的综合设计性实验选题，从实验的设计、准备、实验操作、实验结果的分析到最后实验报告的完成都由学生自己动手，教师对设计报告的科学性、可行性把关、指导，并指导学生实验。每5-6个学生1组。建议选题：从自然界中分离某种或某类细菌、放线菌或真菌（如产芽孢菌、产抗生素菌、嗜盐菌、产淀粉酶），对分离纯化的菌进行初步分类鉴定。